Фиксирование объектов для гистологических целей

Фиксирование различных животных для дальнейшего их исследования путем срезов производится или целиком или по отдельным частям тела и органам. Применяются следующие фиксирующие жидкости.

1. Простейшей фиксирующей жидкостью является 70% спирт, в котором объект выдерживают несколько часов, после чего его перекладывают в свежую порцию спирта для хранения.
2. 70% спирт с прибавлением 5% продажного формалина.
3. Жидкость Этке: 96% спирта 60 частей, 40% формалина 45 частей, уксусной кислоты 2 части.
4. Жидкость Фрейлинга: воды 120 частей, 96% спирта 60 частей, формалина 24 части, ледяной уксусной кислоты 4 части.
5. Насыщенный водный раствор сулемы: отвешивают по 8 г сулемы на 100 см³ воды и кипятят в колбе. Теплый раствор фильтруют в склянку, где он окончательно остывает. При охлаждении из раствора выпадают кристаллы, над которыми жидкость остается всегда насыщенной сулемой. Для фиксирования необходимо прибавить ко взятой порции сулемы 1-2 капли ледяной уксусной кислоты. Сулема плохо проникает вглубь тканей и через хитин, поэтому необходимо фиксировать разрезанное животное. Фиксировать надо не долее 4-6 часов. Эффект действия усиливается, если предварительно подогреть раствор до 60-70°. Когда фиксирование закончено, отсасывают сулему пипеткой и на препарат наливают 50% спирта на 1/2 часа, после чего спирт заменяют 60%. К последнему прибавляют йодной тинктуры до цвета мадеры. Сулема объекта соединяется с иодом., вследствие чего спирт обесцвечивается. К цему снова прибавляют иод до тех пор, пока спирт не перестанет обесцвечиваться. После этого препарат переносят, в 70% спирт. В раствор сулемы нельзя опускать никаких металлических инструментов, которые покрываются матовым налетом и портятся. В случае необходимости пользуются стеклянным или роговым шпателем, или же металлическими инструментами, покрытыми тонким слоем парафина.
6. Жидкость Карнуа: 60 частей абсолютного спирта, 30 частей хлороформа и 10 частей ледяной уксусной кислоты. Фиксируют от 5 минут до 1/2 часа. После фиксирования препарат выдерживают в 100 или 95% спирту, который сменяют несколько раз.
7. Жидкость Дюбоска приготовляется перед употреблением смешиванием трех основных растворов: 15 частей 1% раствора пикриновой кислоты в 90% спирту, 6 частей формола и 3 части ледяной уксусной кислоты. Полезно добавить еще 10% хлороформа. Фиксируют от получаса до четырех часов, после чего препарат переносят в 85% спирт, который сменяют после того, как он заметно окрасится в желтый цвет. Такую смену спирта приходится повторять. Если препараты не идут сразу в заливку в парафин, то для хранения их перекладывают в 75% спирт.
8. Жидкость Левена: 1% пикриновой кислоты в абсолютном или 96% спирту 12 частей, хлороформа 2 части, формалина 2 части, уксусной кислоты 1 часть.

Фиксирование производят в широких чашечках или баночках. Фиксирующая жидкость по объёму должна раз в 30-50 превышать объём объекта. При фиксировании жидкость вытягивает из объекта воду и разжижается; поэтому её время от времени перемешивают или заменяют новой, что приходится делать повторно с крупными объектами. Бывшую в употреблении жидкость выливают вон.

После жидкости Карнуа препараты выдерживают в 95% спирте, который сменяют несколько раз для вытягивания уксусной кислоты. Если материал не идет сразу в заливку, то его через 90% и 85% спирты переносят на хранение в 75% спирт.

После жидкости Левена и Дюбоска препараты переносят в 85% спирт, который сменяют несколько раз по мере его пожелтения. После жидкости Этке и Фрейлинга препараты переносят в 85% спирт, который сменяют несколько раз по мере его пожелтения. После жидкости Этке и Фрейлинга препараты промывают в 90% спирте.

Сведения об изготовлении срезов и о гистологической обработке препаратов можно получить в специальной литературе, указанной ниже.