Приготовление тотальных препаратов без предварительной подготовки

Для сохранения мелких животных (например, членистоногих) и различных стадий их развития в целях последующего изучения изготовляют постоянные микроскопические препараты, без какой-либо особой обработки, по схеме: обезвоживание объекта и заключение его в канадский бальзам.

1. Объект фиксируется 70% спиртом (если он уже был законсервирован в водном растворе формалина, то его с час промывают водой и потом переносят часа на 2-3 в 70% спирт). Препарат прокалывают где-нибудь острой иглой, чтобы дать возможность спирту проникнуть через отверстие в хитине внутрь объекта.
2. Препарат переносят последовательно в 85% и затем в 95% спирт, выдерживая в каждом из них, в зависимости от величины объекта, часов по 6 (в 95% спирту можно оставить препарат на ночь).
3. Препарат переносят на сутки в абсолютный алкоголь для обезвоживания. Для заключения в канадский бальзам препарат необходимо пропитать насквозь маслом; такое "просветление" производится гвоздичным или кедровым маслом.
4. В узкую короткую пробирку с плоским дном наливают гвоздичного или кедрового масла на 1 см, осторожно приливают сверху абсолютного спирта, так чтобы обе жидкости не смешивались друг с другом. В спирт опускают обезвоженные препараты, которые задерживаются в зоне соприкосновения спирта с маслом. Пробирку оставляют стоять в покое до тех пор, пока препараты не опустятся на самое дно, что совершается медленно в связи с диффузией в пограничной зоне. Пипеткой отсасывают спирт и перекладывают препараты на несколько часов в чистое масло в часовом стекле.
5. По окончании описанных процедур контролируют прозрачность препарата. Часовое стекло ставят на черную доску стола. Препарат должен быть невидимым; если на нем видны белесоватые пятна, значит обезвоживание было неполное, и препарат необходимо вернуть обратно в абсолютный спирт.
6. Если препарат прозрачный, то его на шпателе переносят на середину предметного стекла и поливают несколькими каплями ксилола из капельницы, чтобы смыть масло.
7. Сообразуясь с толщиной препарата, вырезают две узкие полоски белого картона или берут кусочки спичек или обламывают кусочки вытянутой стеклянной трубочки и кладут их но бокам препарата так, чтобы они пришлись к самым краям покровлого стекла.
8. Не давая препарату высохнуть, наносят на него палочкой канадский бальзам и накрывают препарат начисто вытертым покровным стеклом. Если бальзама взято мало, то прибавляют каплю его с краю покровного стекла, под которое он втягивается в силу капиллярности.
9. Поправляют иглами положение сдвинувшихся опорных полосок ("ножек") и оставляют препарат на долгое время сохнуть в горизонтальном положении, подбавляя канадский бальзам по мере его усыхания с краев.
10. Такие заключенные в толстый слой канадского бальзама препараты целесообразнее хранить в горизонтальном положении, так как при долгом держании их на боку объект опускается к нижнему краю покровного стекла даже спустя несколько месяцев после его изготовления.
11. Вследствие толщины препарата, его можно изучать только при слабых увеличениях микроскопа.
12. Если препарат в канадском бальзаме был совершенно прозрачен, а через некоторое время он частично или полностью почернел, при рассматривании в проходящем свете микроскопа, значит он не был достаточно проколот перед обезвоживанием (см. выше § 1), из него испарился ксилол, а бальзам внутрь не прошел. Ценные препараты можно попытаться исправить по следующей схеме:
    1. растворить бальзам ксилолом и выдержать препарат в чистом ксилоле;
    2. перенести (осторожно, препарат очень хрупок) в 100% спирт для обезвоживания;
    3. проколоть осторожно препарат иглой; после суточного пребывания в 100% спирту повторяют последовательно § 4-9 настоящей главы.

    Если весь препарат потерял прозрачность, то его с успехом (и с некоторой выгодой) можно рассматривать при сильном падающем свете у светлого окна, близ сильной лампы и т. п. В таком случае с особенной ясностью видима поверхность препарата (волоски, чешуйки, бугорки и т. п.).

13. Стойкие, хотя и не так долго сохраняющиеся препараты можно приготовить, заключая объект в глицерин-желатин. Если объект хранится в формалине, то его хорошо промывают сменяемой водой (несколько часов); затем переносят в смесь глицерина пополам с водой для пропитывания. Спиртовые препараты также предварительно переносят в воду. Препарат в глицерине держат несколько часов или сутки до полного пропитывания.

    Далее препарат кладут на предметное стекло и отсасывают лишнюю жидкость фильтровальной бумагой. На покровное стекло берут кусочек глицерин-желатина и нагревают его на стекле, чтобы желатин расплавился. Полезно слегка нагреть (но не высушить) объект на предметном стекле. Затем покровное стекло быстро переворачивают и висящей каплей желатину опускают на объект так, чтобы масса растеклась между предметным и покровным стеклами и покрыла собою объект. Для прочности препарат с краев покровного стекла обводят железным лаком или жидким канадским бальзамом, чтобы предупредить высыхание массы. Препарат хранится долго. Его преимущество - меньшая прозрачность, чем бальзамного, что иногда бывает нужно.

    Глицерин-желатин приготовляют: растворив в 100 см³ на водяной бане или в горячей воде 10 г желатина в листах, к раствору добавляют 25 см³ глицерина и 0,1 г тимола (растворив последний в воде) или несколько капель карболовой кислоты (против плесени). Все перемешивают и сливают в баночку с пробкой.

14. Особо следует рекомендовать заключение ценных объектов (мелкие личинки насекомых, рачки) и их частей в гуммиарабиковую смесь. Живой или убитый хлороформом объект кладут во влажном состоянии на предметное стекло, наносят каплю гуммиарабиковой смеси требуемой величины и накрывают покровным стеклом с ножками. Следует помнить, что живой объект может иногда выползти из-под стекла. Этот способ выгоден, благодаря быстроте приготовления препарата, заключаемого непосредственно из воды. Просветление умеренное; у насекомых великолепно выступает трахейная система (особенно в жабрах), но наблюдать ее вплоть до капилляров необходимо в ближайшее время по изготовлении препарата, так как с течением времени она теряет резкую видимость в своих мелких частях. Высыхание гуммиарабика прочно укрепляет покровное стекло; в случае необходимости можно добавочно укрепить его кантом из канадского бальзама или менделеевской замазки. Недостатком гуммиарабиковых смесей является то, что в них (в противоположность канадскому бальзаму) не рассасываются случайно попавшие пузырьки воздуха (также и в глицерин-желатине).

Существует несколько гуммиарабиковых смесей.

Фаррантовская смесь, содержит гуммиарабика 36,0 г, дестиллированной воды 350,0 см³, глицерина 350,0 см³. Приготовлять ее надо в холодной воде, перед употреблением должна стоять несколько месяцев. Смесь Букетана содержит: дестиллированной воды 50,0 г, глицерина 20,0 см³, гуммиарабика 40,0 г, хлоралгидрата 50,0 см³ и кокаина 0,5 г. Её приготовляют следующим образом: сначала растворяют в воде гуммиарабик, прибавляют хлоралгидрат и кокаии; по растворении добавляют глицерин; дают отстояться: если нужно, то фильтруют.

Спиртовые препараты перед заключением их в гуммиарабиковые смеси выдерживают сначала в воде. Описанная среда умеренно просветляет препарат, все детали которого выступают весьма ясно.

Полезна также лактофеноловая смесь: кристаллического фенола 1,0 г, мо-лочной кислоты 1,0 г, глицерина 2,0 г, воды 1,0 г. Препарат переносится в эту смесь или из воды или из спирта. Однако смесь не затвердевает.

Расчленение свежего, а также спиртового материала можно производить в воде препаровальными иглами, копьевидной и лопатовидной. Мелкие объекты безопаснее, расчленять на том же предметном стекле, на котором будет приготовлен постоянный препарат. Необходимо только убрать все посторонние частицы и оставить только то, что нужно. Всю излишнюю жидкость убирают фильтровальной бумагой (необходимо остерегаться, чтобы с током воды к фильтровальной бумаге не пристал бы самый объект), поправляют иглой положение объекта и наносят на него каплю гуммиарабиковой смеси или заключают в глицерин-желатин, как указано выше.

Если требуется приготовить бальзамный препарат или иметь полную гарантию сохранности мелкого объекта во время приготовления препарата, то применяют способ автора (Е. Н. Павловского) наклейки объекта на стекло (см. ниже) с последующим заключением препарата в канадский бальзам или в гуммиарабиковую смесь.